AIMP1/p43 - структурний компонент мультисинтетазного комплексу (кодосома) евкаріот, проявляє тРНК зв'язуючу та цитокінову активність. Мета роботи - провести бактеріальну експресію та очистку ізотопно-міченого рекомбінантнога білка AIMP1/p43 в клітинах E. coli для вивчення його просторової структури за методами мультивимірної ЯМР спектроскопії. AIMP1/p43 був експресованний в клітинах E. coli BL21 (DE3) pLysE на мінімальному середовищі M9 з міченням ізотопом 15N та очищено за допомогою метал-хелатуючої хроматографії. Гетероядерні двомірні 1H-15N ЯМР експерименти проводилися в розчині за температури 293 К на ЯМР спектрометрі Agilent DDR2 800. Білок AIMP1/p43 було одержано в 15N-міченій формі як ЯМР зразок. Висока дисперсія сигналів у двомірниї ЯМР спектрах 1H-15N HSQC підтверджує наявність компактної тривимірної структури білка. ЯМР спектр AIMP1/p43 виявляє значне співвідношення сигнал-шум та достатню стабільність, щоб застосувати інші багатовимірні ЯМР експерименти, для визначення структури AIMP1/p43 білка у розчині. Висновки: 15N-мічений білок AIMP1/p43 зберігає стабільність протягом 4 - 7 днів, що надає змогу подальшого одержання важливих ЯМР експериментів для проведення детального структурного аналізу білка у розчині. Дані первинного аналізу спектрів ЯМР вказують на присутність деяких додаткових сигналів у порівнянні зі спектрами ЯМР EMAP II, які можуть бути віднесені до амінокислот N-кінцевого alpha-спірального фрагмента AIMP1/p43.

  Повний текст PDF - 265.637 Kb    Зміст випуску     Цитування публікації

  Якщо, ви не знайшли інформацію про автора(ів) публікації, маєте бажання виправити або відобразити більш докладну інформацію про науковців України запрошуємо заповнити "Анкету науковця"